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Cultivo

Por

Kevin C. Hazen

, PhD, Duke University Health System

Última modificación del contenido jun 2018
Información: para pacientes
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El cultivo es el crecimiento microbiano en un medio nutritivo sólido o líquido; el aumento del número de microorganismos facilita su identificación. El cultivo también facilita la realización de pruebas de sensibilidad a antimicrobianos.

La comunicación con el laboratorio tiene una importancia esencial. Aunque la mayoría de las muestras se cultivan en medios generales (p. ej., agar con sangre o chocolate), algunos patógenos requieren la inclusión de nutrientes o inhibidores específicos (véase tabla Medios selectivos para el aislamiento de bacterias comunes) u otras condiciones especiales para la incubación (p.ej., una temperatura específica, concentración de oxígeno o dióxido de carbono, o duración). Si se sospecha uno de estos patógenos de cultivo más difícil o si el paciente ha estado tomando antimibióticos, se debe informar al laboratorio. También se informa el origen de la muestra para que el laboratorio pueda diferenciar los patógenos de la flora normal específica de esa localización.

Tabla
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Medios selectivos para el aislamiento de bacterias comunes

Microorganismo

Medio de cultivo de elección

Especie de Bacteroides

Agar sangre lacada con kanamicina-vancomicina

Bacteroides fragilis

Bilis-esculina (con gentamicina y bilis) para Bacteroides

Bordetella pertussis

Agar de Bordet-Gengou con meticilina o cefalexina

Agar de Regan-Lowe con cefalexina

Agar carbón con sangre de caballo

Burkholderia cepacia

Burkholderia cepacia agar

Campylobacter jejuni o C. coli

Agares selectivos para Campylobacter (p. ej., agar con cefoperazona-vancomicina)

Corynebacterium diphtheriae

Agar de Tinsdale

Agar sangre con cistina-telurito

Medio sérico coagulado de Löffler

Escherichia coli o patógenos enterohemorrágicos (productores de toxina Shiga, incluso O157-H7)

Agar MacConkey-sorbitol

Francisella tularensis

Agar sangre o chocolate-cistina

Especie de Legionella

Agar carbón tamponado y extracto de levadura

Especie de Leptospira

Medio de Fletcher o Stuart con suero de conejo, o medio para Leptospira con albúmina sérica bovina-Tween 80

Neisseria gonorrhoeae o N. meningitidis

Agar modificado de Thayer-Martin

Agar de Nueva York

Salmonella y Shigella

Pueden crecer en agar estándar de MacConkey o azul de metileno-eosina

Alternativa: Hektoen o xilosa-lisina-desoxicolato, agar para Salmonella-Shigella, caldo de enriquecimiento para gramnegativos o seleniuro

Especie de Vibrio

Agar sacarosa con tiosulfato-citrato-sales biliares

Especie de Yersinia

Agar con cefsulodina, irgasan-novobiocina

Recolección de muestras

La toma de la muestra es importante. Para el diagnóstico de las enfermedades infecciosas, la regla general es tomar la muestra donde está la infección. En las lesiones, se deben tomar muestras de los bordes, y no del centro.

Se desaconseja el uso de hisopos. Sin embargo, si se utiliza un hisopo, se prefiere uno flocado, ya que permite recolectar más muestra. Los hisopos utilizados para los ensayos moleculares deben ser compatibles con el ensayo molecular específico que se desea realizar. Un tipo erróneo de torunda o un mal hisopado pueden producir un resultado falso negativo. Los hisopos con aplicador de madera son tóxicos para algunos virus. Los hisopos de algodón son tóxicos para algunas bacterias, como Chlamydias.

Los hemocultivos requieren la descontaminación y desinfección de la piel (p. ej., con yodopovidona, secado y eliminación con alcohol al 70%). Por lo general se usan varias muestras, cada una obtenida de un sitio diferente; se las toma simultáneamente con los picos de fiebre si es posible. La flora normal de la piel que crece en una sola muestra de hemocultivo generalmente se interpreta como contaminación.

Si se obtiene una muestra de sangre de una vía central, debe obtenerse también una muestra de sangre periférica para ayudar a diferenciar una bacteriemia de una infección del catéter. Los cultivos de los catéteres infectados suelen dar resultados positivos más rápidamente y contienen una mayor carga microbiana que las muestras de sangre periférica obtenidas al mismo tiempo. Algunos hongos, sobre todo los filamentosos (p. ej., especies Aspergillus), en general no pueden cultivarse en la sangre.

La muestra debe transportarse rápidamente, en el medio correcto y en condiciones que limiten el crecimiento de cualquier flora normal que la haya contaminado. Para una cuantificación precisa del patógeno debe impedirse su crecimiento excesivo; las muestras deben llevarse al laboratorio inmediatamente, o refrigerarse si este transporte se ve demorado (como ocurre en la mayoría de los casos).

Consideraciones especiales para la cultura

Algunos cultivos requieren consideraciones especiales.

Las bacterias anaerobias no deben cultivarse en muestras de sitios donde forman parte de la flora normal, porque puede ser imposible la diferenciación entre patógenos y flora. Las muestras deben protegerse del aire, lo que puede ser complicado. Existen medios de transporte anaeróbicos para muestras de hisopados. Sin embargo, las muestras líquidas (p. ej., el contenido de abscesos) son superiores a las muestras por hisopado para la recuperación de bacterias anaerobias. Las muestras líquidas deben recogerse con una jeringa a la cual se ha extraído todo el aire (para minimizar el contacto de la muestra con el oxígeno) y enviarse al laboratorio en la jeringa (tapada, sin la aguja), o transferirse a un vial de transporte anaeróbico.

Las micobacterias son difíciles de cultivar. Las muestras que contienen flora normal (p. ej., el esputo) deben primero descontaminarse y concentrarse. Mycobacterium tuberculosis y algunas otras micobacterias crecen lentamente. El crecimiento de M. tuberculosis típicamente es más rápido en medios líquidos que en medios sólidos; el uso rutinario de sistemas automatizados con medios líquidos puede producir el crecimiento dentro de las 2 semanas, en comparación con 4 semanas necesarias para medios sólidos como el agar de Lowenstein-Jensen. Además, puede haber pocos microorganismos presentes en la muestra. La obtención de varias muestras del mismo sitio puede ayudar a aumentar el rendimiento. Las muestras deben cultivarse durante 8 semanas antes de descartarse. M. ulcerans, que causa úlcera de Buruli, requiere hasta 12 semanas a 32° C en agar de Lowenstein-Jensen. Si se sospecha una micobacteria atípica, el laboratorio debe ser notificado.

Los virus generalmente se cultivan a partir de hisopados y muestras de tejidos, que suelen ser transportados en medios que contienen agentes antibacterianos y antifmicóticos. Las muestras se inoculan en cultivos de tejidos que permitan el crecimiento del virus sospechado e inhiban a otros microorganismos. Los virus que son muy lábiles (p. ej., varicela-zóster) deben inocularse en cultivos de tejidos dentro de la hora de haber sido obtenidos. Los cultivos en tejidos estandarizados son más sensibles. La técnica de cultivo celular en frasco ampolla (shell vial culture), en la que la muestra se centrifuga sobre una monocapa celular dentro de un frasco, proporciona resultados más rápidos (2 días frente a 7 a 14 días). Algunos virus comunes no se pueden detectar usando métodos de cultivo de rutina y requieren métodos alternativos para el diagnóstico (véase tabla Pruebas diagnósticas para los virus comunes que no crecen en los medios de cultivo de rutina), como los siguientes:

Tabla
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Pruebas diagnósticas para los virus comunes que no crecen en los medios de cultivo de rutina

Cuadros comunes

Virus

Pruebas de diagnóstico

Enfermedad febril aguda, meningoencefalitis

Alfavirus, flavivirus, bunyavirus (p. ej., virus de la encefalitis de St. Louis, virus de la encefalitis de La Crosse)

EIA, métodos basados en los ácidos nucleicos

Rotavirus, calicivirus (norovirus), astrovirus

ME o IME; métodos basados en ácidos nucleicos

Virus Epstein-Barr

EIA, métodos basados en los ácidos nucleicos

Fiebres hemorrágicas, coriomeningitis linfocítica

Filovirus, arenavirus (p. ej., fiebre de Lassa, virus Ébola)

EM, Métodos basados en ácidos nucleicos

Hepatitis

Pruebas serológicas, métodos basados en ácidos nucleicos

EIA, métodos basados en los ácidos nucleicos

Hepatitis C, hepatitis G

Métodos basados en los ácidos nucleicos, EIA

Roséola, sarcoma de Kaposi, infecciones diseminadas

Herpesvirus 6, 7, 8

Métodos basados en los ácidos nucleicos, EIA

Sida

HIV

Métodos basados en ácidos nucleicos, EIA, inmunotransferencia de Western

Condiloma acuminado, cáncer de piel genital

Métodos basados en los ácidos nucleicos, EIA

Quinta enfermedad (eritema infeccioso)

Parvovirus humano B19

Métodos basados en los ácidos nucleicos, EIA

Leucemia de células T adultas

Virus linfotrópico T humano

EIA, métodos basados en los ácidos nucleicos

Poliomavirus (JC y BK)

Métodos basados en ácidos nucleicos

Poxvirus

Métodos basados en ácidos nucleicos, ME, cultivo de acuerdo con el virus

Virus de la rabia

EM, IFA, métodos basados en ácidos nucleicos

Virus de la rubéola

EIA, IF, métodos basados en los ácidos nucleicos

EIA = enzimoinmunoensayo; ME = microscopia electrónica; MIE = microscopia inmunoelectrónica; IF = ensayos por inmunofluorescencia.

Las muestras de hongos obtenidas de sitios no estériles deben inocularse en medios que contengan agentes antibacterianos. Debe permitirse el crecimiento durante 3 a 4 semanas antes de descartar la muestra.

Información: para pacientes
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